1. 产品介绍

本产品是一款专为小鼠基因型快速鉴定设计的试剂盒，包含DNA粗提取及PCR扩增体系，具有极强的样本兼容性。使用本产品可直接快速地对小鼠组织（如鼠尾、鼠耳、鼠趾等）样本进行PCR扩增，无需过夜消化、酚氯仿抽提或柱式纯化等操作，使用简便，极大缩短实验耗时。

本产品所提供的 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix 中，包含经过基因工程改造的 DNA 聚合酶、Mg²⁺、dNTPs及优化的缓冲体系，具有极高的扩增效率和抑制物耐受度，使用时只需加入模板和引物，并补水至1×即可进行PCR反应，扩增产物为平末端，同时包含电泳 Loading Buffer，PCR完成之后可直接电泳。

2. 产品特点

1). 操作简便：配备了强力的裂解缓冲液，可以快速裂解样品，释放基因组DNA，裂解产物可以直接加入到PCR反应体系中，无需纯化。

2). 样本兼容性强：适用于多种小鼠组织的直接扩增。

3). 快速方便：无需模板纯化，裂解产物直接进行PCR扩增，缩短实验时间。

3. 试剂盒组份

a：Lysis solution 为裂解液，请戴手套操作。

b：2×Mouse Tissue Direct PCR Mix：包含DNA聚合酶、dNTP混合物、4 mM Mg²⁺、PCR反应增强剂、稳定剂，电泳 Loading Buffer等。

4. 储存事项

1). Lysis solution 的保存条件为 2~8℃，若低温保存可能会出现沉淀，在使用前务必于37℃加热使其充分溶解。Lysis solution短期内使用可放置4℃保存，如长期保持请放置于-20℃。

2). Proteinase K solution和2×Mouse Tissue Direct PCR Mix的保存条件为 -20℃。

3). 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix应避免反复冻融，短期内多次使用可置于 4℃保存。

5. 稳定性

本试剂盒在-20 ℃储存24个月不影响使用效果。

6. 注意事项

1). 为了避免样品间出现交叉污染，需准备多个取样工具。

2). 建议使用新鲜采取的小鼠组织，取样量不宜过大，以避免影响扩增结果。

3). 建议扩增片段长度 3 kb 以内，以便扩增效率最佳。

4). 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套。

5). 本产品仅作科研用途。

7. 操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）

7.1  样品基因组 DNA 释放

1). 剪取 2-5 mm² 鼠耳或肝脏组织，或1-3 mm 鼠尾、或1-2 个脚趾，置于1.5 mL 离心管中。

2). 在上述离心管中加入200 μL Lysis solution 和 10 μL Proteinase K solution，轻轻涡旋混匀，使得样品完全被浸润，短暂离心。

3). 56℃恒温孵育10 min。

4). 孵育完成后，将样品置于95℃或者沸水浴中加热5 min 灭活 Proteinase K。

5). 将裂解产物充分震荡混匀，12,000 rpm 离心 5 min，上清液可作为模板直接用于PCR 扩增。模板如需保存，可将上清液转移至另一个无菌离心管中，并置于-20℃保存，保存时间为2 周。

※注意：

[1] 组织应尽量剪碎，以便裂解反应更顺利进行。

[2] 56℃孵育，一般 10 min 即可满足多数 PCR 需求。若需要的 DNA 量较大或样品较难裂解，可将时间延长至 20-30 min。

[3] 组织块不需完全裂解，残余的部分在后续离心步骤中可被除去。

[4] 如果裂解样品上清中模板含量太高，使用前，可用ddH₂O稀释2-20倍后作为PCR模板。

7.2  PCR 扩增

1). 将 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix 从-20℃取出后置于冰上解冻，上下颠倒混匀后参考下表配制 PCR反应体系（冰上操作）：

a：推荐采用 50 μL 体系，建议初步采用 2 μL 上清液作为模板起始投入量，若产物量较少，可适当增加模板投入量；加入量不应超过体系的 1/10，加入量过高时，可能会抑制 PCR 扩增。

2). 参考PCR反应条件

3). 对照实验设定

在PCR结果分析时，不管是阳性结果或阴性结果，如果没有对照反应，都不能确定结果是否可靠。为了便于后续实验结果的分析，建议在进行PCR时，设置阳性（小鼠基因组DNA）和阴性（通常为生理盐水） PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

8. 常见问题与解决办法