柱式超纯快速植物RNA小提试剂盒 
柱式超纯快速植物RNA小提试剂盒
产品说明：
本产品采用了独特的裂解系统，无需使用β-巯基乙醇、苯酚、氯仿等有毒试剂，适合各种简单 植物组织材料（如叶片、茎、幼 苗等）的 RNA 提取，操作快速，可有效提取分子量大于 200 nt 的 RNA。利用该试剂盒提取的植物 RNA 纯度高，极少含蛋白质、 基因组 DNA 和其它杂质的污染； 可直接用于 RT-PCR、Northern blot、Real Time PCR、构建 cDNA 文库等各种下游实验。
实验准备：
1. RNase-free DNase 母液的配制：用 1 mL RNase-free 注射器抽取 550 µL RNase-free ddH2O， 打进装有 RNasefree DNase（2000 U）干粉的玻璃瓶中，轻柔混匀，分装后-20℃保存（可保存 9 个 月）。
注：从-20℃ 融化后的 RNase-free DNase 母液保存于 4℃（可保存 6 周），不要再次冻存。
2. 使用前请先在漂洗液 2（WB2）中按瓶标加入无水乙醇，并做好标记。
操作步骤：
1．取 450 µL 裂解液加入到 1.5 mL RNase-free 离心管中。
2．组织样品经液氮研磨后，将研磨成粉末状的样品（50-100 mg）加入到上述含有 450 µL 裂解 液的 1.5 mL 离心管中，涡旋剧烈震荡混匀直至裂解液中无明显沉淀。
注 ：在 60℃孵育 1-3 min 将有助于植物组织裂解，但是对于某些富含淀粉的样品，请不要加热 处理，防止因淀粉引起的样品膨胀。
3．将过滤柱放入收集管中，然后将步骤 2 中所有的溶液用移液器转移至过滤柱中，12000 rpm 离心 5 min，小心吸取收集管中的滤液至新的 1.5 mL RNase-free 离心管中，吸头尽量避免触及收集 管中的细胞碎片沉淀。 注 ：由于裂解液较粘稠，所以将溶液转移至过滤柱时，可以剪去部分吸头末端
4．缓慢加入 0.5 倍滤液体积的无水乙醇，上下颠倒混匀（此时可能会出现沉淀），将得到的溶 液和沉淀一起转入离心吸附柱（吸附柱放在收集管中），12000 rpm 离心 30 s，弃除收集管中的废 液，将吸附柱放回收集管中。
5．向吸附柱中加入 350 µL 漂洗液 1（WB1），12000 rpm 离心 30 s，弃除收集管中的废液，将 吸附柱放回收集管中。
6．RNase-free DNase 工作液的配制：取 10 µL RNase-free DNase 母液放入新的 RNase-free 离心 管中，加入 70 µL 膜反应液，轻柔混匀。
注 ：解冻后的 RNase-free DNase 母液保存于 4 ℃（可保存 6 周），避免反复冻融。
7．向吸附柱中央加入 80 µL RNase-free DNase 工作液，室温放置 15 min。
8．向吸附柱中加入 350 µL 漂洗液 1（WB1），12000 rpm 离心 30 s，弃除收集管中的废液，将 吸附柱放回收集管中。
9．向吸附柱中加入 500 µL 漂洗液 2（WB2）（使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000 rpm 离心 30 s，弃除收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
10．重复操作步骤 9 一次。
11．将吸附柱放回收集管中，12000 rpm 离心 3 min，此步骤十分重要，否则残留的乙醇（漂洗 液 2（WB2）中的成分）会影响 RNA 的使用。
12．将吸附柱放入一个新的 1.5 mL RNase-free 离心管中，加入 50-100 µL RNase-free ddH2O，室 温放置 1-2 min，12000 rpm 离心 1 min，得到 RNA 溶液。所得 RNA 溶液应立即使用或适量分装后 存放于-80℃待用。
注意事项：
1． 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放 于普通住宅区。
2． 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
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